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概念：

活性氧（ROS）是含氧自由基和易形成自由基的過氧化物。

ROS是正常代謝的天然副產(chǎn)物，并且在細(xì)胞信號傳導(dǎo)和體內(nèi)平衡中具有重要作用。但在環(huán)境壓力脅迫下（如輻射、強(qiáng)氧化物處理等），ROS水平會急劇增加，從而對細(xì)胞結(jié)構(gòu)造成嚴(yán)重?fù)p害，被稱為氧化應(yīng)激。

線粒體在呼吸產(chǎn)生能量時(shí)會將電勢能儲存在線粒體內(nèi)膜。內(nèi)膜兩側(cè)的氫離子及其他離子濃度的不對稱形成了線粒體膜電位。細(xì)胞受到凋亡誘導(dǎo)后線粒體內(nèi)膜通透性增加，線粒體膜電位下降。

鈣(Calcium)是哺乳動物體內(nèi)最為豐富的礦物質(zhì)。鈣離子參與調(diào)控很多細(xì)胞生命活動過程，包括肌肉收縮、細(xì)胞粘附、激素/神經(jīng)遞質(zhì)釋放、糖原代謝、細(xì)胞增殖/分化、血凝、神經(jīng)或突觸傳遞以及骨骼結(jié)構(gòu)支持在內(nèi)的大量生理過程。

原理與方法：

ROS：DCFH-DA本身無熒光，可透過細(xì)胞膜。進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)被胞內(nèi)的酯酶水解生成DCFH，失去細(xì)胞膜通透性，從而積聚在細(xì)胞內(nèi)。細(xì)胞內(nèi)的活性氧能將無熒光的DCFH氧化成有綠色熒光的DCF。通過檢測熒光強(qiáng)度可反映活性氧的水平。

JC-1：正常情況下，JC-1在線粒體基質(zhì)中形成聚合物，發(fā)紅色熒光；而凋亡線粒體由于膜電位下降或喪失，JC-1以單體的形式存在于胞漿中，產(chǎn)生綠色熒光。JC-1顏色的變化能直接反映線粒體膜電位。

鈣離子：Fluo-3AM和Fluo-4AM是常用的檢測細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的熒光探針。熒光染料可以穿透細(xì)胞膜，本身熒光非常弱，其熒光不會隨鈣離子濃度升高而增強(qiáng)。進(jìn)入細(xì)胞后，可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切形成Fluo-3或Fluo-4，從而被滯留在細(xì)胞內(nèi)，可以和鈣離子結(jié)合,產(chǎn)生較強(qiáng)的熒光。

                                                                    ROS檢測

                                                     JC-1檢測

                                                     鈣離子檢測